Những sáng tác và việc tiên phong trong thể loại cũng như phong cách viết truyện tranh của ông đã khiến ông được nhiều người gọi là "cha đẻ của manga", "vị thánh tổ của manga". Nét đặc trưng về những đôi mắt lớn của các nhân vật trong truyện tranh Nhật Bản là do ông khởi xướng, dựa vào các nhân vật hoạt hình bấy giờ như Betty Boop và chuột Mickey. Như một dấu ấn cho sự nghiệp của ông, bộ "Complete Manga Works of Tezuka Osamu" có khoảng 400 phần, hơn 80.000 trang; đó chưa là con số đầy đủ. Toàn bộ các tác phẩm của ông có hơn 700 truyện manga với khoảng 170.000 trang.

Ban đầu ông được đào tạo theo ngành bác sĩ nhưng ông đã cống hiến cuộc đời mình cho sản xuất và sáng tác truyện manga. Phần lớn các truyện này chưa bao giờ được dịch từ tiếng Nhật vì vậy cũng không đến được với độc giả phương Tây. Ông bắt đầu sự nghiệp truyện tranh của mình từ khi còn là sinh viên đại học và sử dụng kiến thức y học và khoa học của mình để viết những truyện khoa học viễn tưởng - manga. Thật ra Tezuka không thích làm bác sĩ, ông sợ máu. Thế nhưng, ông ứng dụng kiến thức y khoa của mình vào tác phẩm nổi tiếng thế giới chính là Bác sĩ quái dị.

Những nhân vật nổi tiếng mà ông tạo ra: Astro Boy (ở Nhật Bản là Tetsuwan Atomu), Bác sĩ quái dị, Nữ Công Tước (Loạt truyện tranh manga về nữ giới đầu tiên), Phượng Hoàng (ở Nhật Bản là Hi no Tori), sư tử trắng Kimba (Có thể đây là nguồn cảm hứng cho hãng Disney tạo nên bộ phim hoạt hình "Vua sư tử") và Adolf. "Tác phẩm để đời" của ông là "Phượng Hoàng"[15] - một câu chuyện về sự sống và cái chết, liên quan đến truyền thuyết về sự bất tử cho những ai uống máu của phượng hoàng.

Tezuka lãnh đạo xưởng phim hoạt hình Mushi Pro ('Bug Production'), đây cũng là mô hình tiên phong trong lĩnh vực hoạt hình truyền hình ở Nhật Bản. Tên của xưởng phim bắt nguồn từ từ kanji ("虫"), được dùng để viết tên ông.

Nhiều họa sĩ Manga trẻ tuổi chưa thành danh cũng đã từng sống tại chung cư Tokiawa-so nơi mà Tezuaka đã từng sống. (Chữ "-so" có nghĩa là rẻ tiền). Những người đã từng ở gồm Ishinomori Shotaro; Akatsuka Fujio; với Abiko Motou và Fujimoto Hiroshi (những người đã làm việc với nhau với bút danh Fujiko Fujio).